FFPE DNA NGS检测全流程解决方案COMPLETE SOLUTION OF FFPE DNA SAMPLES FOR NGS

工欲善其事,必先利其器。ABclonal科学家经过长时间的打磨,开发了适用于FFPE样本的DNA提取、质量评估、文库构建、靶向捕获等一系列产品,可为客户提供一体化研究解决方案。

FFPE DNA提取和质控

FFPE样本需要先进行脱蜡,常用的脱蜡试剂是二甲苯,易造成核酸片段化,且对人体有毒害作用。同时,FFPE样本中DNA分子与其它生物大分子(蛋白质、RNA)交联在一起,需要解除交联才能有效释放出DNA。ABclonal AFTSpin FFPE DNA Isolation Kit同时兼容二甲苯和无毒脱蜡液两种方法,可为实验人员提供更加安全的操作流程。试剂盒提供了优化的解交联步骤,能够高效释放DNA,释放出的DNA特异性地被离心柱中的硅胶膜结合,通过漂洗缓获得高纯度的DNA。整个提取过程只需 20 分钟(除消化时间),得到的 DNA 可直接用于 PCR、qPCR、NGS等实验。

使用AFTSpin FFPE DNA Isolation Kit对各类型FFPE样本进行DNA抽提,使用Qubit进行浓度测定。结果显示不同样本均能高质量提取,且DNA总量均高于竞品。

NGS的建库和测序成本较高,因此,提取DNA不仅要总量高,质量比如完整性也尤其需要关注。因此,在建库之前需要对FFPE DNA进行更加全面和准确的质控。ABclonal FFPE DNA QC Kit包含针对4个不同大小目的产物的特异性引物,多重PCR扩增后直接进行电泳检测,根据PCR条带数量对DNA质量划分等级,根据精确分级灵活选择不同建库策略,提高文库制备成功率。同时,还可以根据分级为后续建库时PCR循环数提供指导,减少过度PCR扩增造成的假阳性。

使用FFPE DNA QC Kit对各类型FFPE样本进行QC质控,Human Blood gDNA作为阳性对照。根据PCR扩增的条带数量将样本划分为1-5等级。

条带数量 分级 DNA总量30-200 ng DNA总量5-30 ng
建库策略 PCR循环数 建库策略 PCR循环数
4 1 常规/打断酶建库 6-9* 单链DNA建库 9-12***
3 2 常规/打断酶建库 7-10* 10-13***
2 3 常规/打断酶建库 9-12* 11-14***
1 4 常规/打断酶建库 11-14** 12-15***
0 5 单链DNA建库 13-16*** 13-16***
  • *, 注:建库试剂盒为RK20255和RK20161;**, 注:建库试剂盒为RK20255;***, 注:建库试剂盒为RK20228
  • 不同QC等级样本可灵活选择不同建库试剂盒,选择合适的PCR循环数。

FFPE DNA建库策略

在高通量测序过程中,文库质量是决定实验是否成功的关键因素。若文库质量不佳,则有可能影响结果的可靠性。同时,高质量的文库也是保障FFPE 样本检测成功的必要前提。为了适应FFPE样本建库成功率低,以及文库中reads 比对率低、高PCR Duplication rate、文库丰度低、高假阳性率等特点,ABclonal致力于测序建库试剂的升级和拓展,提供针对不同分级FFPE DNA样本高质量的文库制备方案。

  • 根据QC 评级,选择最合适的建库方式,能够显著提高FFPE样本建库成功率

ABclonal Rapid Plus DNA Lib Prep Kit for Illumina V2(RK20255)是一款升级的DNA文库制备试剂盒,搭配独特的DNA损伤修复模块II(DDRE II),能够修复FFPE样本中损伤的DNA,提高文库构建的成功率和文库产量,同时并不会增加测序的假阳性,从而实现对FFPE DNA样本进行有效分析。该试剂盒除了兼容常规超声打断的DNA,也可以适配酶法打断的DNA建库,酶法打断相比超声文库产量更高,同时可以确保不同类型样本(如FFPE,cf/ctDNA)使用相同的建库试剂盒。

试剂盒中的 Damaged DNA Repair Enzymes II(DDRE II)显著提高了文库产量,尤其对于低质量的FFPE DNA样本,产量提升了2.5倍!

ABclonal Rapid Plus DNA Lib Prep Kit for Illumina V2搭配DNA Frag Module,相比超声打断显著提高文库产量。

靶向捕获测序

目标序列捕获测序是目前基因组学研究中的一个热点技术,仅对感兴趣的基因组区域进行富集测序,不仅能够有效降低测序成本,还可以对目标区域进行深度测序,增加了目标区域内遗传变异的检测灵敏度和准确性,可以一次性检测单核苷酸变异、易位、结构变异、插入和缺失及拷贝数变异等。为个体靶向治疗,免疫治疗及术后复发监控等临床应用提供指导。ABclonal靶向捕获试剂可用于Illumina测序平台,试剂经过精心优化,具有高灵敏性和特异性,可用于各种致病基因的研究以及健康筛查等。

  • ABclonal的BK0003捕获试剂盒突变检出率与标准品预期基本一致

产品分类

高准确度的FFPE DNA样本提取方案
高品质的FFPE DNA样本测序文库解决方案