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ABScript II One Step SYBR Green RT-qPCR Kit (RK20404)

货号: RK20404
促销价:   ¥250
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产品信息

产品描述
ABScript II One Step SYBR Green RT-qPCR Kit是采用SYBR Green I 嵌合荧光法进行一步法RT-qPCR反应的专用试剂盒。本试剂盒以RNA为模板,使用基因特异性引物,逆转录和PCR反应可在同一管内连续进行,不用额外的开管、移液操作,大大提高了检测通量,并能有效防止污染。本产品可以对扩增产物进行实时检测,显著提高了检测灵敏度,非常适合于一些微量RNA的检测。本制品整合了ABScript II Reverse Transcriptase和Taq DNA Polymerase的优势,配合优化的缓冲体系后,扩增效率和特异性进一步加强,能稳定地进行一步法RT-qPCR反应。此外,反应需要的所有酶都制成了Enzyme Mix,操作更加简单方便。
产品特点
  • 逆转录和qPCR在同一反应管中操作,简化了实验操作,降低了污染的风险;
  • 结果可靠:重组的反转录酶降低了RNase H活性,提高了热稳定性和cDNA合成效率,热启动的Taq DNA Polymerase提升了PCR扩增的特异性;
  • 灵敏度高:优化的Buffer体系大大提高了PCR反应的扩增效率,检测灵敏度可达0.1pg总RNA;
产品应用
real-time PCR
产品保存
-20℃避光保存
产品组分
组分10 RXN
(50 μL/ RXN)
100 RXN
(50 μL / RXN)
2X One Step SYBR Green RT-qPCR Buffer250 μL1.25 mL X 2
ABScript II One Step Enzyme Mix20 μL200 μL
50X ROX Dye I10 μL100 μL
50X ROX Dye II10 μL100 μL
Nuclease-free H2O1.25 mL1.25 mL X 2

FAQs

Q1:熔解曲线出现多峰

引物设计不够优化:根据引物设计原则重新设计引物。

引物浓度太高:适当降低引物浓度。

扩增曲线不光滑:信号太弱,提高模板浓度并重复实验。

个别扩增曲线骤降:反应管内有气泡,由于温度升高后气泡破裂,使仪器检测到的荧光值突然降低所致。处理样本时要注意离心,加样过程中尽量避免吸打出气泡。

扩增曲线上飘:仪器测试默认基线设置为3至15个循环荧光值的标准差,可根据实际扩增情况进行相应基线调整。

反应循环数不够:一般设置循环数为40,但需注意的是过多的循环会增加过多的背景信号,降低数据可信度。

确认引物是否降解:长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性,以排除引物降解的可能性。

确认程序中是否设置了信号采集步骤:两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段;三步法扩增程序应当将信号采集设置在72℃延伸阶段。

模板浓度太低:减少稀释程度并重复实验。

模板降解:重新制备模板,重复实验。

预变性时间不足:本产品采用热启动的Taq酶,请确保按照反应程序设置的3 min预变性时间进行实际操作。

扩增效率极低:优化反应条件,重新设计引物。

模板浓度太低:减少稀释程度,重复实验。

模板降解:重新制备模板,重复实验。

PCR产物太长:一般将PCR产物长度设计为70~200 bp范围内。

反应体系中存在PCR反应抑制剂:一般为加入模板时带入,加大模板稀释倍数或者重新制备新的模板。

预变性时间不足:本产品采用热启动的Taq酶,请确保按照反应程序设置的3 min预变性时间进行实际操作。

反应体系或者水被污染:更换新的Buffer或者水进行重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

引物二聚体的出现:一般在35个循环以后阴性对照出现扩增属正常情况,可配合熔解曲线进行分析。

加样体积不准:使用性能较好的移液枪,扩大反应体系,增加组分加入体积。

定量PCR仪孔间温度不一致:定期校准仪器。

模板浓度太低:模板浓度越低,重复性越差,减少模板稀释度或提高加样体积。

阈值设置:对于不同板间的重复试验,请确保两次试验仪器阈值设置保持一致。

文献引用 (29)

折叠内容 >

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客户数据及评论 (2)

折叠内容
CustomerMay 152019
评分
Experiment Type
RT,qPCR
Sample
293T RNA
Description
实验模板为293T 细胞RNA,检测基因为GAPDH 和RXFP4; 从图中检测结果GAPDH(黄色)和RXFP4(红色)可以看到, ABclonal One-Step RT-qPCR KIT 对于基因GAPDH 和RXFP4 的检测实验中,实验重复性好,特异性强,灵敏度高。
CustomerMay 152019
评分
Experiment Type
RT,qPCR
Sample
H716 RNA
Description
实验模板为H716 细胞RNA,检测基因为GAPDH 和RXFP4;从图中检测结果GAPDH(黄色)和RXFP4(红色)可以看到, ABclonal One-Step RT-qPCR KIT 对于基因GAPDH 和RXFP4 的检测实验中,实验重复性,特异性和灵敏度均表现出较好的结果。

说明书

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