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Dot-blot analysis of all sorts of peptides using K63-linkage Specific Polyubiquitin antibody (A18164) at 1:1000 dilution.
Publishing research using A18164? Please let us know so that we can cite the reference in this datasheet.
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Ubiquitination,onetypeofthemostcommonpost-translationalmodification,mediatestheregulationofproteinhomeostasisinvivo.SinceubiquitinitselfcontainsmultiplelysineresiduesandoneN-terminalfreeaminogroup,eighttypesofubiquitinchainscanbeformed.? K63-linked polyubiquitin chains exert nonproteolytic functions in vivo, such as protein trafficking, kinase/phosphatase activation, and DNA damage control, all of which might be important in regulation of cancer survival and development （PMID: 19217402，PMCID: PMC3008764）.
* 该数据来源于赛特新思(citexs.com)
来自于发表文献，仅供参考所用，ABclonal不承担任何责任。
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首先，一般抗体不推荐客户回收利用，抗体使用之后缓冲体系已经发生改变，不同客户在回收抗体的保存条件上也会有差异，所以抗体回收使用效果无法保证。另外，ABclonal公司也做过一批抗体回收验证测试，测试结果显示不同抗体可回收次数不同，一般效价越高的抗体，可重复使用的次数越多，客户可根据实验情况来确定。
注：我们将孵育完毕后剩余的抗体回收到离心管中置于4℃保存，效价高的抗体可至少保存1周，至少重复利用3次。
武汉爱博泰克生物（ABclonal）科技有限公司是国产品牌，她成立于2011年，公司依托ABclonal美国波士顿抗体与蛋白研发中心、中国光谷生物城(武汉)抗体生产基地以及上海张江分子酶研发中心，凝聚了十余位来自哈佛大学、麻省理工、复旦大学、上海交大、中科院生化细胞所和武汉大学的全球知名分子和免疫学方面博士，组成我们的科学家团队，通过聚焦抗体与酶核心技术，致力于打破国际技术的垄断，将公司打造成为科研工具和诊断原料的国内领导品牌，乃至弯道超越国际巨头。 我们拥有包括兔多克隆抗体、小鼠单克隆抗体、兔单克隆抗体的生产研发平台，同时也有包括WB,IHC,IF,IP,CHIP在内的检测平台，我们对每一支自产的抗体进行了严格的检测。当然，我们部分直销地区也可以帮客户代购进口品牌的产品。同时也有抗体定制服务。ABclonal抗体优势：1，严自检，保质量；2产品多，指标全；3，价格低，货期短。注：ABclonal抗体价格体系详情见附件
ABclonal抗体成分在平时工作当中，常会有客户咨询我们的抗体用的什么buffer进行保存，一般来说，我们的buffer的成分是：PBS含0.03%的proclin300、0.05%牛血清白蛋白、50%甘油；也有一些是PBS含0.03%的proclin300，50%甘油。防腐剂 Proclin 300活性成分主要是2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮（MCI）和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮（CMCI）。ProClin生物灭活剂能够迅速穿透细胞膜，抑制对细胞呼吸至关重要的特定酶，因此一接触微生物有机体就会立即抑制细胞活性。ProClin的多个特定毒性位点可以防止微生物产生高水平的耐药性。
一、实验仪器试剂和耗材
二、实验步骤
Dot Blot检测采用NC膜，取NC膜裁成6.5cm宽长条，并在其上画长宽为1cm×1cm正方形小格（在膜上面的蓝色纸上画，画格时膜（白色）与蓝色纸必须完全重叠，让蓝色纸上的正方形小格能在膜上留下正确的划痕）。
多肽使用0.45μM的NC膜，DNA/RNA Oligo 使用0.2μm的NC膜。
将不同浓度的多肽用PBS稀释为成50ng/ul（稀释为需要的浓度即可）。或者将不同浓度的DNA/RNA Oligo 用无酶水稀释至10μM（稀释为需要的浓度即可）。
揭开膜上面的蓝色保护纸，用移液器吸取50ng/μL多肽稀释液2ul点在膜上1cm×1cm正方形小格中心，即多肽包被量为100ng（包被量根据需求调整）。点样完成后，将NC膜放入37℃烘箱中30min。
如样本为DNA/RNA Oligo，则用移液器吸取10μM DNA/RNA Oligo稀释液2ul点在膜上1cm×1cm正方形小格中心，即每小格DNA/RNA Oligo包被量为100μM（包被量根据需求调整）。点样完成后，将NC膜放入37℃烘箱中30min，再用紫外交联20min。
把膜放入相应的大小的抗体孵育容器中，加入适量Blocking Buffer室温封闭1h。
封闭结束10min前，用Antibody Dilution Buffer稀释一抗备用。封闭结束后去除封闭液，加入稀释好的一抗工作液，室温2h或4℃过夜。
去除一抗工作液，加入适量TBST Buffer洗杂4次，5min/次。
洗杂结束前10min，用Antibody Dilution Buffer稀释二抗备用。去除TBST Buffer，加入稀释好的二抗工作液，室温1h。
去除二抗工作液，加入适量TBST Buffer洗杂4次，5min/次。
