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CUT&Tag Assay Kit（pAG-Tn5）V3 for Illumina (RK21513)

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货号: RK21513
价 格：   ￥3600
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产品信息

产品描述
CUT&Tag Assay Kit (pAG-Tn5) V3 for Illumina（RK21513）是一款针对Illumina测序平台，用于研究DNA-蛋白质互作的文库构建试剂盒。适用于哺乳动物细胞，组织或植物样品经特殊处理后也可用本试剂盒进行相关实验。
Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag)是一种新兴的研究DNA-蛋白质互作的方法，克服了传统ChIP-Seq 技术的很多缺点，省时，操作简便，数据信噪比高，需要的细胞起始量低。本试剂盒使用与Protein A/G融合的Tn5转座酶，该融合蛋白能与抗体结合，并在目的靶标附近切割DNA，从细胞中回收DNA后直接进行PCR扩增即可完成文库构建。试剂盒内组分均经过严格的质量控制，保证产品稳定性和可重复性。
产品特点
  • 细胞投入量兼容范围广：兼容100-100,000个细胞投入量；
  • 回收效率高：采用链霉亲和素磁珠有效回收切割片段；
  • 实验周期短：建库步骤简捷，整个建库时间只需要3-4 hr；
  • 下机数据优秀：下机数据信噪比更高，重复性更好；
  • 兼容qPCR：利用spike in进行数据矫正，下游兼容qPCR定点验证；
工作流程
产品保存
RK21513(2-1)：-20℃保存；RK21513(2-2)：2 ~ 8℃保存。
产品组分
模块 组分名称 6次 24次
RK21513(2-1) pAG-Tn5 Transposome V2 6 µL 24 µL
10X CT Wash Buffer2 1.2 mL 4.8 mL
Antibody Buffer2 300 µL 1.2 mL
10X Dig-300 Buffer2 420 µL 0.84 mL × 2
B&W Buffer 6 mL 24 mL
NE1 Buffer 1.5 mL × 2 12 mL
MgCl2 (1 M) 50 µL 50 µL
rHSA (100 mg/mL) 3 µL 12 µL
5% Digitonin3 54 µL 216 µL
Protease Inhibitor Cocktail (100X，EDTA-Free) 180 µL 720 µL
10% SDS 30 µL 120 µL
500 mM EDTA 50 µL 50 µL
Spike-in DNA2 (5 ng/μL) 6 µL 24 µL
Gloria Nova 2X PCR Mix for NGS 150 µL 600 µL
RK21513(2-2) ConA Beads 60 µL 240 µL
AFTMag NGS DNA Clean Beads 600 µL 1.2 mL × 2
Streptavidin Beads 60 µL 240 µL
1X ConA Bind Buffer 1.26 mL 5.04 mL

检测数据

折叠内容 >
1. 细胞投入量兼容范围广
cut&tag试剂盒 K562冻存细胞加入量 一抗 文库浓度ng/uL Mapping Rate Duplication Peak Number FRiP Score
Vendor-A 10000 H3K4me3 44.8 99.11% 39.88% 15900 40.37%
100 H3K4me3 28.4 77.66% 54.19% 6232 9.53%
ABclonal RK21513 10000 H3K4me3 25 98.56% 38.10% 14181 46.67%
100 H3K4me3 53.4 93.26% 64.33% 7212 29.71%

分别用RK21513和竞品，对100和10,000个K562细胞进行CUT&TAG文库构建，抗体使用ABclonal自产TriMethyl-Histone H3-K4 Rabbit mAb （A22146），均可获得较好的数据。

2. 兼容qPCR
组别 细胞投入量 spike-in DNA2 ∆CT1-92FR —∆∆CT1-92FR Relative Enrichment flod-92FR
阳性对照 100000cells 5 pg 3.59 7.00 127.63
10000cells 500 fg 2.94 6.06 66.57
1000cells 50 fg 2.08 4.96 31.04
100cells 5 fg 3.55 3.82 14.15
阴性对照 100000cells 5 pg 10.59 0 1
10000cells 500 fg 9.00 0 1
1000cells 50 fg 7.04 0 1
100cells 5 fg 7.37 0 1

用RK21513分别对10W-100个细胞进行CUT&TAG建库，抗体使用ABclonal自产 TriMethyl-Histone H3-K4 Rabbit mAb（A22146），最后用qPCR进行靶位点检测，可以看出靶位点Ct值和样本起始量呈现良好的线性关系

3. 兼容冻存样本和植物组织
冻存组织类型 细胞核投入量 PCR循环数 文库产量ng/ul-22ulH2O洗脱
#1 小鼠脑 10万 14 25.2
#2 小鼠肝 10万 14 16.6
#3 小鼠肾 10万 14 35
#4 小鼠脾 10万 14 11.8

用RK21513分别对不同小鼠冻存组织样本进行CUT&TAG建库，抗体使用ABclonal自产TriMethyl-Histone H3-K4 Rabbit mAb（A22146），结果显文库产量及峰型符合预期

FAQs

说明书

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CUT&Tag Assay Kit（pAG-Tn5）V3 for Illumina