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筛选器:

Immunohistochemistry of paraffin-embedded Human lung adenocarcinoma (negative control sample) using Thyroglobulin Rabbit mAb (A3405) at dilution of 1:100 (40x lens).

Immunohistochemistry of paraffin-embedded Human normal thyroid using Thyroglobulin Rabbit mAb (A3405) at dilution of 1:100 (40x lens).

Immunohistochemistry of paraffin-embedded human thyroid cancer using Thyroglobulin Rabbit mAb (A3405) at dilution of 1:100 (40x lens).

Immunofluorescence analysis of human thyroid using Thyroglobulin Rabbit mAb (A3405) at dilution of 1:100 (40x lens). Blue: DAPI for nuclear staining.

All(4)|
货号: A3405
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产品内部验证

反应物种Human
产品应用测试种属及综合评分
IHCHuman:
IFHuman:
推荐稀释比
  • IHC 1:50 - 1:200
  • IF 1:50 - 1:200
理论分子量305kDa
实际分子量Refer to figures
存储缓冲液Store at -20℃. Avoid freeze / thaw cycles.
Buffer: PBS with 0.02% sodium azide,0.05% BSA,50% glycerol,pH7.3.
阳性样本
细胞定位
纯化方式Affinity purification

抗原信息

免疫原A synthesized peptide derived from human Thyroglobulin
序列Email for sequence
进行序列比对

实验步骤

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实验步骤

免疫组织化学标准操作流程(石蜡切片——非磷酸化项目检测)

一、实验仪器及试剂

1、实验器材

微波炉、4℃冰箱、恒温恒湿箱、烘箱、光学显微镜、移液器、孵育湿盒、抗原修复盒。

2、实验试剂
  • (1) 缓冲液:0.01M PBS pH7.2±0.2; 0.01M pH7.2 PBST;
    试剂名称 1*PBS/L 试剂名称 1*PBST/L
    NaH2PO4 0.23g 1*PBS溶液 1L
    Na2HPO4 1.15g Tween 20 溶液 0.001L
    NaCl 8.5g 用稀HCl溶液和NaOH溶液调pH值
  • (2) 修复液(可选):
    pH6.0 0.01M柠檬酸修复液(1L):C6H8O7•H2O 0.4g;NaC6H5O7•2H2O 3g;pH6.0;
    pH7.0 0.01M PBS修复液(1L):KH2PO4 0.07g;NaCl 7.89g;Na2HPO4 0.45g;KCl 0.10g;pH7.2-7.4;
    pH8.0 0.05M Tris-EDTA修复液(1L):C4H11NO3 6.05g;C10H14N2Na2O8•2H2O 0.29g;用稀HCl调至pH8.0;
    pH9.0 0.01M Tris-EDTA修复液(1L):C4H11NO3 1.21g;C10H14N2Na2O8•2H2O 0.37g;pH9.0。
  • (3) 封闭液:5%空白山羊血清;
  • (4) 3%过氧化氢(需新鲜配制,30% H2O2与dH2O体积比1:9);
  • (5) 抗体稀释液:1X PBS / 5% 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100;
  • (6) EnVision Systems检测体系, HRP显色系统: HRP RABBIT/MOUSE及配套DAB显色液;
  • (7) 脱蜡液、无水乙醇(分析纯)、去离子水(dH2O)、Mayer’s苏木素、中性树胶封片剂。

二、实验步骤

1.水化/脱蜡:
  • (1)烤片:将石蜡切片按同一朝向放置在切片架上,将其放入55℃的恒温箱中烤片30分钟;同时将脱蜡液1缸一起放入55℃的恒温箱中;
  • (2)脱蜡至水:将石蜡切片连同切片架一起放入脱蜡液1缸中,再一起从恒温箱中取出置于常温,5分钟后,将切片取出浸入到常温脱蜡液2缸中,并按照脱蜡液2、脱蜡液3、无水乙醇1、无水乙醇2、无水乙醇3的顺序依次将石蜡切片放入缸中,每缸5分钟;用流水清洗切片5分钟。
注意:流水清洗时水流不能直接对着切片;操作过程中需一直保持切片处于湿润状态。
2.内源性过氧化物酶灭活:
  • 将切片完全浸入到3%双氧水溶液中,室温,孵育10分钟;完成后流水清洗5分钟。
注意:内源性酶含量高的组织,可以延长灭活时间至15-20分钟;双氧水需新鲜配制,可提前5-10分钟配制3%的双氧水。
3.抗原修复(可选):
  • (1)方法一,微波热修复:将切片浸入盛有修复液的修复盒中,将抗原修复盒盖斜盖在修复盒上;整体放入微波炉中,高火加热3分钟后停火,微波炉内静置5分钟;再高火加热3分钟后停火,微波炉内静置5分钟;随后中低火加热1分钟后停火,微波炉内静置5分钟,然后将切片连同抗原修复盒拿出缓慢冷却至室温。待修复液温度降至室温后,用缓冲液PBS洗涤3次,每次1min。
  • (2)方法二,高压热修复:在高压锅中,加入抗原修复液,高火预热;待修复液沸腾后将切片置于其中,并完全浸泡组织,盖好锅盖,扣上压力阀,高火继续加热;待限压阀开始转动喷气后调至中火,同时开始计时2分钟;计时结束后离开热源,自然降压后将高压锅移入冷水中缓慢冷却。待修复液温度降至室温后,用缓冲液PBS洗涤3次,每次1min。
注意:修复液需完全浸没切片上组织;修复过程中严禁打开仪器或中断运行程序;修复完成后避免快速冷却;修复液可根据实验需求自行选用修复液。
4.染色:
  • (1)封闭:待修复液温度降至室温后,从修复盒中取出切片;用缓冲液PBS清洗切片2次,每次3分钟;去除切片上的缓冲液;在组织切片上滴加5%空白山羊血清封闭液;将切片水平放置在底部呈有水的孵育湿盒中,于37℃恒温孵育30分钟;
  • (2)一抗孵育:去除封闭液,在组织切片上滴加用缓冲液PBS稀释的一抗,水平放置于孵育湿盒中,于4℃孵育过夜;
  • (3)复温:将孵育湿盒取出室温复温15-30分钟,去除抗体工作液,用缓冲液PBST洗涤1次,5分钟;用缓冲液PBS洗涤3次,每次5分钟;
  • (4)二抗孵育:在组织切片上滴加二抗工作液后水平放置于孵育湿盒中,于37℃恒温孵育1h;
  • (5)去除切片上的溶液,用缓冲液PBST洗涤1次,5分钟;用缓冲液PBS洗涤3次,每次5分钟;
  • (6)显色:显色前5分钟,配置DAB显色工作液,C液:B液体积比1:100,充分混匀;在组织切片上滴加显色工作液,显微镜下密切观察颜色变化情况,通常10-60秒即可得到合适的染色强度;将切片浸入大量dH2O中即可终止显色;
  • (7)复染、返蓝:将切片浸入Mayer’s苏木素中复染切片,用流水清洗10分钟。
注意:染色过程中需一直保持切片处于湿润状态;染色过程中所有试剂使用过程中均需保证完全覆盖切片上组织。
5.脱水、封片:
  • (1)脱水:将清洗后的切片于无水乙醇中浸泡1次,10秒;高温(55℃-60℃)下完全干燥;
  • (2)封片:在切片中心滴加适量中性树胶,并加盖盖玻片。

免疫荧光实验操作流程(细胞样本)

一、实验仪器及试剂

1、实验器材

4℃冰箱、恒温恒湿箱、通风橱、移液器、避光孵育湿盒。

2、实验试剂
  • (1) 缓冲液:0.01M pH7.2±0.2 TBS ;0.01M pH7.2±0.2 TBST
    试剂名称 1*TBS/L 试剂名称 1*TBST/L
    Tris 1.21g 1*TBS 1L
    NaCl 8.8g Tween 20 溶液 0.001L
    用稀HCl溶液和NaOH溶液调pH值 用稀HCl溶液和NaOH溶液调pH值
  • (2) 固定液:4%中性甲醛固定液(TBS缓冲液配制)
  • (3) 抗体稀释液:1X TBS / 5% 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100
  • (4) 通透剂:0.3% Triton X-100(TBS缓冲液配制)
  • (5) 二抗(可选):
    Alexa Fluor 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)# AS074;
    Alexa Fluor 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)# AS073;
    Alexa Fluor 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)# AS077;
    Alexa Fluor 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)# AS076;
  • (6) 染核试剂:1mg/mL DAPI(用时使用0.01M pH7.2 TBS缓冲液配制)
  • (7) 去离子水(dH2O)、抗荧光衰减封片剂。

二、实验步骤

1.样本前处理
  • (1) 弃去培养基,在细胞上缓慢加入常温TBS,清洗2次,每次5秒;
  • (2) 细胞固定:在细胞上覆盖 4%中性甲醛固定液(TBS缓冲液配制),置于4℃,固定15min;固定液需足量;
  • (3) 固定液的清洗:去除固定液,使用4℃预冷的TBS缓冲液,漂洗3次,每次5分钟;
注意:需避免实验操作时温差过大或温度骤变;固定液需保证足量,可过量使用;甲醛有毒性,加固定液和固定后的清洗需在通风橱内操作。
2.染色步骤
  • (1)封闭:用5%空白山羊血清将样本完全覆盖,切片需放置于湿盒内,细胞孔板可直接将孔板密封好,置于37℃恒温恒湿培养箱孵育30min;
  • (2)一抗孵育:去除封闭液,直接在样本上滴加TBS缓冲液配制的一抗工作液,样本需完全覆盖,切片需放置于湿盒内,细胞孔板可直接将孔板密封好,置于4℃孵育过夜;
  • (3)复温:将样本置于常温,复温15min,去除抗体工作液,用缓冲液TBST洗涤1次,5分钟;用缓冲液TBS洗涤3次,每次5分钟;
  • (4)二抗孵育:在样本上滴加与一抗种属对应的荧光二抗工作液,样本需完全覆盖,避光,37℃,孵育1小时;去除二抗工作液,用缓冲液TBST洗涤1次,5分钟;用缓冲液TBS洗涤3次,每次5分钟;
  • (5)染核:在样本上滴加DAPI工作液,使用0.01M pH7.2±0.2 TBS缓冲液配制,DAPI溶液:TBS缓冲液体积比1:500,避光,室温,孵育10分钟;去除DAPI工作液,用缓冲液TBST洗涤1次,5分钟;用缓冲液TBS洗涤3次,每次5分钟;
  • (6)细胞孔板可直接加入抗荧光衰减封片剂后,于荧光显微镜下观察并采集图像;细胞涂片滴加抗荧光衰减封片剂,然后加盖盖玻片封片,再于荧光显微镜下观察并采集图像;细胞爬片可取出,盖在滴加抗荧光衰减封片剂的载玻片上后,于荧光显微镜下观察并采集图像。
注意:实验中,所有试剂滴加应准确、快速、足量,不能出现干片的情况;染色步骤从二抗孵育开始,后续所有步骤都需注意避光操作;染色完成后需及时观察并采集图像,避免干燥和荧光物质淬灭。

免疫荧光实验操作流程(石蜡切片)

一、实验仪器及试剂

1、实验器材

微波炉、4℃冰箱、恒温恒湿箱、烘箱、移液器、避光孵育湿盒、抗原修复盒。

2、实验试剂
  • (1) 缓冲液:0.01M pH7.2±0.2 TBS ;0.01M pH7.2±0.2 TBST
    试剂名称 1*TBS/L 试剂名称 1*TBST/L
    Tris 1.21g 1*TBS 1L
    NaCl 8.8g Tween 20 溶液 0.001L
    用稀HCl溶液和NaOH溶液调pH值 用稀HCl溶液和NaOH溶液调pH值
  • (2) 修复液(可选):
    pH6.0 0.01M柠檬酸修复液(1L):C6H8O7•H2O 0.4g;NaC6H5O7•2H2O 3g;pH6.0;
    pH7.0 0.01M PBS修复液(1L):KH2PO4 0.07g;NaCl 7.89g;Na2HPO4 0.45g;KCl 0.10g;pH7.2-7.4;
    pH8.0 0.05M Tris-EDTA修复液(1L):C4H11NO3 6.05g;C10H14N2Na2O8•2H2O 0.29g;用稀HCl调至pH8.0;
    pH9.0 0.01M Tris-EDTA修复液(1L):C4H11NO3 1.21g;C10H14N2Na2O8•2H2O 0.37g;pH9.0。
  • (3) 封闭液:5%空白山羊血清
  • (4) 抗体稀释液:1X TBS / 5% 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100
  • (5) 二抗:
    Alexa Fluor 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)# AS074;
    Alexa Fluor 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)# AS073;
    Alexa Fluor 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)# AS077;
    Alexa Fluor 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)# AS076;
  • (6) 染核试剂:1mg/mL DAPI(用时使用0.01M pH7.2±0.2 TBS配制)
  • (7) 去离子水(dH2O)、抗荧光衰减封片剂。

二、实验步骤

1.水化/脱蜡:
  • (1) 烤片:将石蜡切片按同一朝向放置在切片架上,将其放入55℃的恒温箱中烤片30分钟;同时将脱蜡液1缸一起放入55℃的恒温箱中;
  • (2) 脱蜡至水:将石蜡切片连同切片架一起放入脱蜡液1缸中,再一起从恒温箱中取出置于常温,5分钟后,将切片取出浸入到常温脱蜡液2缸中,并按照脱蜡液2、脱蜡液3、无水乙醇1、无水乙醇2、无水乙醇3的顺序依次将石蜡切片放入缸中,每缸5分钟;用流水清洗切片5分钟。
注意:流水清洗时水流不能直接对着切片;操作过程中需一直保持切片处于湿润状态。
2.抗原修复:
  • (1)方法一,微波热修复:将切片浸入盛有修复液的修复盒中,将抗原修复盒盖斜盖在修复盒上;整体放入微波炉中,高火加热3分钟后停火,微波炉内静置5分钟;再高火加热3分钟后停火,微波炉内静置5分钟;随后中低火加热1分钟后停火,微波炉内静置5分钟,然后将切片连同抗原修复盒拿出缓慢冷却至室温。
    注意:修复液需完全浸没切片上组织;修复过程中严禁打开微波炉门;修复完成后不可快速冷却;修复液可根据实验需求自行换用其他类型修复液。
  • (2)方法二,高压热修复:在高压锅中,加入抗原修复液,高火预热;待修复液沸腾后将切片置于其中,并完全浸泡组织,盖好锅盖,扣上压力阀,高火继续加热;待限压阀开始转动喷气后调至中火,同时开始计时2分钟;计时结束后离开热源,自然降压后将高压锅移入冷水中缓慢冷却。待修复液温度降至室温后,用缓冲液洗涤3次,每次1min。
    注意:修复液需完全浸没切片上组织;修复过程中严禁打开仪器或中断运行程序;修复液可根据实验需求自行换用其他类型修复液。
3.染色:
  • (1)封闭:用5%空白山羊血清将样本完全覆盖,切片需放置于湿盒内,置于37℃恒温恒湿培养箱孵育30min;
  • (2)一抗孵育:去除封闭液,直接在样本上滴加TBS缓冲液配制的一抗工作液,样本需完全覆盖,切片需放置于湿盒内,置于4℃孵育过夜;
  • (3)复温:将样本置于常温,复温15min,去除抗体工作液,用缓冲液TBST洗涤1次,5分钟;用缓冲液TBS洗涤3次,每次5分钟;
  • (4)二抗孵育:在样本上滴加与一抗种属对应的荧光二抗工作液,样本需完全覆盖,避光,37℃,孵育1小时;去除二抗工作液,用缓冲液TBST洗涤1次,5分钟;用缓冲液TBS洗涤3次,每次5分钟;
  • (5)染核:在样本上滴加DAPI工作液,使用0.01M pH7.2 TBS缓冲液配制,DAPI溶液:0.01M pH7.2 TBS缓冲液体积比1:500,避光,室温,孵育10分钟;去除DAPI工作液,用缓冲液TBST洗涤1次,5分钟;用缓冲液TBS洗涤3次,每次5分钟;
  • (6)滴加抗荧光衰减封片剂,然后加盖盖玻片封片,再于荧光显微镜下观察并采集图像。
注意:实验中,所有试剂滴加应准确、快速、足量,不能出现干片的情况;染色步骤从二抗孵育开始,后续所有步骤都需注意避光操作;染色完成后需及时观察并采集图像,避免干燥和荧光物质淬灭。

靶点背景信息

Thyroglobulin (Tg) is a glycoprotein homodimer produced predominantly by the thryroid gland. It acts as a substrate for the synthesis of thyroxine and triiodothyronine as well as the storage of the inactive forms of thyroid hormone and iodine. Thyroglobulin is secreted from the endoplasmic reticulum to its site of iodination, and subsequent thyroxine biosynthesis, in the follicular lumen. Mutations in this gene cause thyroid dyshormonogenesis, manifested as goiter, and are associated with moderate to severe congenital hypothyroidism. Polymorphisms in this gene are associated with susceptibility to autoimmune thyroid diseases (AITD) such as Graves disease and Hashimoto thryoiditis. [provided by RefSeq, Nov 2009]

基因ID7038
Swiss ProtP01266
别名AITD3; TGN
研究领域

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